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令人糾結的PCR,求高手指點

2016-11-28技術資料

令人糾結的PCR,求高手指點

今天PCR,目標條帶1500bp左右,模板是cDNA,68度延伸1min40s,結果出來了2000-3000bp(據marker)的條帶,這如何是好?
注:cDNA P其他基因沒有問題

給出的信息還不夠詳細啦~目標片段不對,有可能是引物設計不對。最好能上圖,這樣大家才能更好地幫你解決問題。

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請問你引物的TM值是多少?

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注意調節退火溫度,與引物的Tm值有關的

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延伸溫度好高啊,我們一般都不用這么高的

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這延伸溫度還高啊,一般延伸不都72度么
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不好意思,搞錯了,你的退火溫度多少啊?用的什么酶?

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我看大家P的目的片段長得時候才用68度延伸,你的也不是很長啊

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估計是引物有問題,現在我也遇到了相同的問題,擴增1000bp的激發子片段,結果跑出2000多的片段,檢查Tm,降低一下試試,跑個梯度確定一下溫度。

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核對下引物,會不會是引物出了問題呢!

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跑marker只能粗略的估計大小,有時候也有差別,我覺得可以測一個序列鑒定一下序列,測一個樣品,花不了多少錢。